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2020.05.27

结核分枝杆菌(M.tuberculosis),俗称结核杆菌(tubercle bacillus),是引起结核病的病原体。1882年由德国细菌学家郭霍(Robert Koch,1843-1910)发现并证明为人类结核病的病原菌。该菌感染人体导致的结核病是严重影响人类生命健康的一种传染病,经过与其几个世纪的抗争后逐渐得到控制,但近年来由于多种因素的影响,该疾病变得日趋严重。

结核分枝杆菌,图片来源于:百度百科

基于QuanID微生物质谱系统,融智生物可提供结核分枝杆菌一体化高通量、高自动化解决方案,包括对人结核分枝杆菌和牛结核分枝杆菌进行种以及更高水平的鉴定,并能高效地为结核病诊断提供有价值的检测结果。

鉴定时间更短:与传统的结核分枝杆菌鉴定流程相比,微生物前处理时间和菌种鉴定时间65分钟以内可完成,是高效的结核分枝杆菌鉴定解决方案。
鉴定结果更准确:融智生物已建设完成本地化分枝杆菌菌种质谱数据库,包含超过160 种,1000 余株分枝杆菌信息,可以有效地对分枝杆菌属微生物进行鉴定。

融智生物QuanID微生物质谱系统结核分枝杆菌鉴定流程图

在前些天的推送中,我们与大家一起分享了微生物质谱用于细菌鉴定的样本前处理技巧(详见:超详细的微生物质谱操作流程来了~码住!),接下来我们将与大家分享微生物质谱鉴定结核分枝杆菌的样本前处理技巧:

1 试剂与材料

微生物基质试剂盒

分枝杆菌/诺卡菌试剂盒

纯水

接种环:1μL, 10μL

微量移液器和吸头:1000μL, 100μL, 2.5μL

离心管(EP 管)2.0mL

超声波清洗器、涡旋混合器、转速可达15000rpm的高速离心机、金属浴

2 对样本的要求

QuanID微生物质谱系统不能直接检测临床标本或混合培养物,待检样本必须是经培养基分离培养后的纯化菌落。

为了满足鉴定准确性的要求,须采用新鲜培养的菌株,分枝杆菌需培养至观察到明显菌落。

3 操作
3.1 制备分枝杆菌
制备分枝杆菌过程与制备细菌方法不同,在加基质前,需要灭活步骤。
(以下步骤必须遵循生物安全3级规范)

1) 使用移液器吸取250μL 纯水至2.0mL EP管(分枝杆菌试剂盒中已加入硅珠的EP管),用接种环挑取适量菌于该EP管中。

2) 95℃金属浴中加热30min。

3) 从金属浴中取出EP管,待温度降低到50℃以下(手感不烫时),加入750μL R1试剂。

4) 在涡旋混合器上,使用最大速度,涡旋10min,以使分枝杆菌充分灭活。

5) 使用涡旋混合器混合5~10s,并立即使用移液器将悬浊液移入空的2.0mL EP管,注意不要移取任何硅珠,丢弃吸头。

6) 15000rpm离心2min,弃去上清。再次离心,使用10μL移液器完全去除残余的上清液,整个过程不应触碰沉淀。

7) 室温下干燥沉淀数分钟。

8) 加入试剂R2(5~20μL,根据沉淀量调整,要求试剂R2加入量没过沉淀),充分混匀。

9) 加入与R2等体积的试剂R3,充分混匀。超声5min。

10) 15000rpm离心2min。

11) 吸取1μL上清液,滴加到靶点上,室温下自然干燥。

12) 1小时内,在干燥后的样本点上滴加1.5μL微生物基质液,室温下自然干燥,待测。

注意: 准备好靶板后,须在2小时内进行检测。

3.2 上机
3.3 数据采集
3.4 数据分析

结核分枝杆菌质谱图

 

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